Биохимия метаболизма. Учебное пособие. Е. А. Бессолицына

лишенных хорошо отграниченных внутренних и внешних компартментов, не происходит синтеза АТФ, сопряженного с переносом электронов.

      6. Вещества, переносящие протоны через внутреннюю митохондриальную мембрану, разрушают протонный градиент и таким образом вызывают разобщение окисления и фосфорилирования.

      7. Компоненты дыхательной цепи уложены в мембране упорядоченно, «бок о бок», поперек мембраны, как предусматривается хемиосмотической теорией.

      Второй важный факт это точки переноса протонов, или точки генерации протонного градиента, так как естественно, что в каждой реакции генерация не происходит. Следовательно важным моментом является определение количества и положения точек генерации протоннного градиента.

      Механизмы генерации протонного градиента

      Согласно хемиосмотической теории энергия окислительно-восстановительных реакций тратится на перенос протонов из матрикса митохондрии в межмембанное простанство. Но не все реакции в электронтранспортной цепи вызывают перенос протонов. Эти реакции выявлялись несколькими методами.

      1. Соотношение Р/О при окислении нескольких субстратов.

      В данном случае изучают соотношение фосфата, перешедшего в состав органичеких соединений к поглощенному кислороду. Для этого измеряют концентрацию свободного фосфата в среде с митохондириями до добавления субстрата, а затем после. Полученная разность концентраций является количеством фосфата, который перешел из свободного в связанное состояние, то есть был затрачен на синтез АТФ из АДФ и фосфата. Второй параметр – это поглощенный кислород. Измеряем концентрацию кислорода в начале и в конце опыта, разность равна количеству кислорода превратившемуся в воду в ходе работы электронтранспортной цепи. Делим разность концентраций свободного фосфата в среде на разность содержания кислорода и получаем соотношение P/O. Это значение различается для разных субстратов добавленных в оытную смесь с митхондриями.