Dentro de la gran variedad de parásitos que afectan a los niños, los protozoos intestinales suelen ser de difícil identificación, debido a la variabilidad en la cantidad de formas de resistencia (quistes y ooquistes) eliminadas en la materia fecal o la dificultad en la detección de los trofozoítos, pues por lo general, las muestras no llegan al laboratorio en buenas condiciones o no se examinan durante el lapso de tiempo adecuado. El diagnóstico de estas patologías se hace por medio de exámenes directos, de concentración, pruebas inmunológicas, cultivos y pruebas moleculares (25-28).
Examen directo en materia fecal
El examen directo de materia fecal es el método de elección para identificar las formas parasitarias (quistes y trofozoítos) de amibas y flagelados intestinales como Entamoeba histolytica, Entamoeba dispar, Entamoeba moshkovskii, Iodamoeba butschlii, Endolimax nana, Entamoeba coli, Entamoeba hartmanni, Giardia duodenalis, Chilomastix mesnili, Trichomona hominis, Blastocystis hominis y Balantidium coli (8,9).
Recolección de la muestra
La toma de muestra de materia fecal debe hacerse directamente desde el paciente y no desde el suelo o la taza sanitaria; los recipientes de la recolección deben estar limpios y facilitar el transporte seguro de la muestra. A fin de preservar los trofozoítos, se debe evitar el contacto de la muestra con la orina (7).
En caso de disentería, es importante examinar la muestra en los primeros 20 minutos después de la recolección; pasado ese tiempo, los trofozoítos comienzan la autolisis, lo que dificulta la identificación de Entamoeba histolytica. Si se observan zonas con moco y sangre, se prefiere que el examen microscópico se realice en ellas, ya que existe mayor probabilidad de encontrar los trofozoítos de E. histolytica o Balantidium coli (7).
Examen directo en solución salina fisiológica
Materiales y reactivos
Los materiales y reactivos necesarios para este método son: portaobjetos, cubreobjetos y solución salina al 0.85 % (ver anexo 1) (8,9).
Procedimiento
1. Colocar una gota de solución salina sobre un portaobjetos.
2. Tomar pequeñas cantidades de materia fecal de diferentes partes de la muestra con el extremo de un aplicador.
3. Homogenizar la materia fecal tomada con el aplicador en la gota de solución salina.
4. Colocar un cubreobjetos y observar al microscopio con objetivos de 10X y 40X.
El examen directo en solución salina es útil para observar trofozoítos en movimiento, quistes y ooquistes.
Examen directo en solución de yodo o lugol
Materiales y reactivos
Los materiales y reactivos necesarios para este método son: portaobjeto, cubreobjetos y lugol (ver anexo 2) (8,9).
Procedimiento
Seguir los pasos descritos para el examen en solución salina fisiológica, pero en lugar de la solución salina, emplear una gota de solución yodada o lugol. Con esta técnica, se visualizan estructuras de los quistes y ooquistes, como los depósitos de glucógeno de color pardo rojizo, el citoplasma de coloración amarilla y el núcleo con la morfología característica de cada especie. Los trofozoítos se inmovilizan y se deforman de manera considerable.
Método de concentración de formol-éter
Materiales y reactivos
Los materiales y reactivos necesarios para este método son: vasos desechables, aplicadores, bajalenguas, gasas, tubo de centrífuga, portaobjetos, cubreobjetos, formol al 10 % (ver anexo 3), éter etílico, solución salina al 0.85 % (ver anexo 1) y lugol (ver anexo 2) (8,10).
Procedimiento
1. Tomar aproximadamente 1 g de materia fecal con un bajalenguas y colocar la muestra en un vaso desechable.
2. Agregar 10 ml de formol al 10 % y homogenizar.
3. Filtrar a través de gasa doble en un tubo de centrífuga.
4. Agregar 1 ml de éter etílico y mezclar vigorosamente durante un minuto.
5. Centrifugar a 800 g durante 5 minutos.
6. Eliminar el sobrenadante.
7. Mezclar el sedimento con un aplicador y realizar el montaje en solución salina al 0.85 % y solución de lugol, como se describió en el aparte que referencia el examen directo en materia fecal.
Con este método se aumenta la probabilidad de encontrar los quistes u ooquistes de los protozoarios en las muestras.
Técnica de Ritchie-Frick modificada
Materiales y reactivos
Los materiales y reactivos necesarios para este método son los mismos que se utilizan en el método de concentración de formol-éter y solución alcohólica (ver anexo 4) (3,11,28).
Procedimiento
Con el fin de identificar protozoos intestinales, primero se lleva a cabo el protocolo para la identificación de helmintos y luego se continúa con el procedimiento para la identificación de protozoos.
Identificación de helmintos
1. Mezclar 2 g de materia fecal y 15 ml de formol al 10 % en un frasco.
2. Homogenizar y mezclar por agitación.
3. Filtrar a través de dos capas de gasa en tubo de centrífuga.
4. Centrifugar a 800 g durante 10 minutos.
5. Anotar el volumen del sedimento y descartar el sobrenadante.
6. Multiplicar el volumen del sedimento por 7, agregar este valor en volumen de solución alcohólica y mezclar.
7. Colocar 0.05 ml de la suspensión en un portaobjetos, colocarle un cubreobjetos y observar al microscopio.
8. Realizar los recuentos de huevos y larvas de helmintos, promediar y multiplicar el valor por 160 en cada caso; este valor corresponde al número de huevos o larvas por mililitro de heces filtradas y sedimentadas.
Identificación de protozoarios
1. Completar el volumen restante de la suspensión anterior con solución alcohólica y centrifugar a 800 g durante 10 minutos.
2. Eliminar el sobrenadante y agregar el mismo volumen de solución alcohólica.
3. Agregar 3 ml de éter y homogenizar.
4. Centrifugar a 800 g durante 10 minutos.
5. Eliminar el sobrenadante.
6. Colocar en un portaobjetos una gota de la suspensión para lugol y solución salina al 0.85 %, colocar un cubreobjetos y observar al microscopio con objetivos de 10X y 40X, que posean micrómetro ocular.
Este método aumenta la probabilidad de encontrar los quistes u ooquistes de los protozoarios en las muestras examinadas.
Reporte de resultados
Las especies patógenas y no patógenas halladas en la muestra deben ser reportadas. Si se encuentran