Для культивирования клеток периферической крови у животных после анестезии эфиром брали стерильно 2—5 мл крови из яремной вены. Затем эритроциты осаждали 10%-м раствором желатины, плазму отсасывали и разводили в соотношении 1:2 питательной средой Игла или №199. После этого добавляли фитогемагглютинин в количестве 0,01 мл фирмы «Difco P» на 5 мл культуральной среды. Культивирование клеток проводили при 37 °С 72 ч. За 2 ч до окончания культивирования вводили колхицин из расчета 0,25 мкг на 1 мл культуры. Затем клетки осаждали центрифугированием (Захаров А. Ф., Бенюш В. А., Кулешов Н. П., Барановская Л. И., 1982). Все последующие манипуляции по обработке материала сходны с приготовлением хромосом из костного мозга животных.
Препараты хромосом красили методами равномерной и дифференциальной окрасок.
Для равномерной окраски хромосом заблаговременно готовили 0,1% растворы азура и эозина на дистиллированной воде. Рабочий раствор красителя составляли в соотношении: 6 частей азура, 3 части эозина и 9 частей водопроводной воды, длительность окраски была около 15 мин. Затем препараты ополаскивали водопроводной водой и высушивали. Кроме того, для окраски использовали и готовую краску Романовского-Гимза. Ее разведение подбирали в зависимости от качества, чтобы время окраски было 10— 15 мин.
Дифференциальную G -окраску хромосом проводили с учетом рекомендаций А. П. Дыбана и В. С. Баранова (1978). Перед окраской препараты погружали в этиловый спирт на 10— 15 мин, после чего высушивали их на воздухе. Затем препараты обрабатывали около 20 с 0,01% раствором трипсина производства фирмы «Spofa», ополаскивали в спирте и промывали водопроводной водой. Покраску проводили красителем Романовского-Гимза при разведении 1:10 фосфатным буфером (рН 7,0). Оптимальное время окрашивания подбирали эмпирически в зависимости от качества краски.
А также использовали рекомендации А. Ф. Захарова и соавторов (1982) о возможности добавления трипсина в раствор красителя на фосфатном буфере. Для получения G-окраски на каждые 10 мл красителя добавляли 0,3—0,5 мл 0,01% раствора трипсина, окраску препаратов проводили сразу после обработки этиловым спиртом.
Воспроизведение G-окраски зависело от индивидуальных особенностей крыс и сроков хранения препаратов, поэтому