По свидетельству летописца, на похоронах Анастасии И. IV рыдал и «от великого стенания и от жалости сердца» едва держался на ногах. Однако, пришел в себя довольно быстро и «Умершей убо царице Анастасии нача царь яр быти и прелюбодействен зело». Желая образумить царя, обеспокоенное духовенство решило подыскать ему новую невесту. Попытки засватать дочь польского короля Екатерину не увенчались успехом. В 1560 посланцы царя Ф.В.Вокшерин и С. Мякинин отправились на Кавказ «у Черкаских князей дочерей смотрети». 15 июля 1561 в Москву была доставлена княжна Кученей (? – 1569), дочь кабардинского князя Темрюка («из черкас пятигорских девица»). 20 июля того же года она была окрещена по православному обряду митрополитом Макарием и получила имя Мария Темрюковна. 21 июля 1561 И. IV венчался с ней в Успенском соборе. Начиная с 1562 Мария неоднократно сопровождала царя в поездках по монастырям. 21 марта 1563 родила царевича Василия, который умер в двухмесячном возрасте.
По характеру вторая жена оказалась прямой противоположностью первой. Мария с удовольствием наблюдала за медвежьими потехами, пытками и казнями осужденных. Свирепствовал и ее брат Михаил. Вокруг царя подобрались новые люди (Малюта Скуратов-Вольский, Федор Басманов, Богдан Вольский, Василий Грязной, князь Афанасий Вяземский и др). Они внушили царю мысль о неверности и предательстве Марии. В феврале 1565 И. IV покинул Москву и переехал в Александровскую слободу. Марию Темрюковну с собой не взял, а приставил к ней надежный караул и велел не выпускать из Кремля. По сообщению английского дипломата Горсея: «тем временем он отдалил свою черкесскую жену, постриг ее в монахини и поместил в монастырь». 6 сентября 1569 Мария неожиданно скончалась, по мнению Пискаревского летописца: «а тогда же опоил царицу Марью Черкаскову». Брат же ее, Михаил Темрюкович, по велению И. IV, был посажен на кол.
Современники обвиняли «злонравную» Марию в «порче нрава» царя, вызвавшей массовые репрессии и разгул опричнины. Вскоре царь вновь возжелал жениться. Гонцы разъехались по всему царству и привезли в Москву полторы тысячи девиц. После многомесячных смотрин осталось 24 кандидатки. И. IV выбрал из них дальнюю родственницу Малюты Скуратова Марфу Васильевну Собакину. Венчание состоялось 28 октября 1571 в Троицком соборе Александровской слободы. Почти сразу молодую, ядреную девку, сразила неведомая хворь. Она стала «сохнуть» на глазах, а 13 ноября 1571 отдала